Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现口内致病球蛋白到浮现1改进型肝炎病理病征的的发展赴援在成人末期就有极佳的说明了，多个口内致病球蛋白乙型肝炎的成人之中有70%在血清转换后10周内患肝炎，而随访15年的成人这一分之一减少到84%。相比之下之下，占去病理1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的肺癌机制还从未赢取应有的深入研究。

越来越多的人开始用到分期系统会来定义1改进型肝炎的的发展：变异在浮现多种口内致病球蛋白时进到第1期中，浮现血糖所致时进到第2期中，浮现病征时进到第3期中。一些多发口内致病球蛋白乙型肝炎的变异，在1期和2期，的发展较快，并发展为肺癌的1改进型肝炎。我们之前说明了了除此以外成员在首次扫描到多种口内致病球蛋白抽取后至少10年无肝炎的极快的发展者，这组成员高血压伤亡人数少，但特点十分确切。随后，我们发现口内致病球蛋白甲基化CD8+T巨噬细胞反可不会在的发展较快的高血压之中大体上不存在，但在更进一步肺癌和长期存在的肝炎高血压之中很容易扫描到。这可能指造出，与的发展高血压相比之下，这些高血压致病反可不会的平衡增强。

早期深入研究指造出，尽管平衡性T巨噬细胞(Treg)存量正常，但肝炎高血压存在一些特性缺陷，其之中还包括对IL-2的反可不会意志力减缓。此外，肝炎高血压之中的波动CD4+T巨噬细胞可能对平衡更具抵抗性，观感为波动T巨噬细胞的可借减弱，自然导致的Treg和形肾脏导致的可借Treg，以及免疫球蛋白历程的CD4+T巨噬细胞之中IL-2反可不会减弱。本深入研究的最终目标是说明了了CD4+平衡性T巨噬细胞(Treg)在一小群极较快的发展者之中的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX深入研究是一项以成年人辅以的侧向深入研究，在21岁请注意患病的高血压亲属之中健康检查1改进型肝炎的危险考量。我们之前说明了了长期较快的发展者的特点，他们保持多重口内致病球蛋白乙型肝炎超过10年，但从未浮现肝炎的病理病征，快性或非进行时性致病。随后，10名继续保持无肝炎并愿意备有大量血液抽取的较快的发展者纳入T和B巨噬细胞特性深入研究。在迄今的深入研究之中，8名快的发展者(SP组成员)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内致病球蛋白乙型肝炎。所有的行动者都处于1改进型肝炎的发展的1期，尽管一些人随后失去了口内致病球蛋白对某些免疫球蛋白的乙型肝炎反可不会，然而，一名高血压现在处于2期至少6年，但从未浮现病理病征，一名高血压被诊断为肝炎，该患者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究之中对该供形体进行时了单独评估。剥离外周血单个核孙子巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞可借试验评估供形体之中Treg的高频赴援、性状和特性。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)进行时无全权负责聚类深入研究，评估Treg性状。

结果：与心理健康供形体相比之下，来自快的发展形体的梦境CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类揭示，启动时的梦境CD4+ Treg高频赴援减少，与利尿剂可借的TNFR关的蛋白(GITR)传达减少有关。一名HbA1c增大的高血压与的发展较快者和比如说的抽取相比之下，Treg谱各不相同。特性深入研究指造出，与心理健康供形体相比之下，来自较快的发展形体的Treg介导的CD4+波动T巨噬细胞可借明显受到破坏。观感为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的可借减少。

示意图1 深入的性状深入研究揭示，CD4+Treg亚改进型在快的发展函数调用之中减少。由FlowSOM作用于的Treg二楼，聚集地在来自所有供形体的来生CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物传达比对造出10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个不同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个终端均是由一个协同(100个协同)，较小的元协同(10个元协同)在终端组成员周围手绘。每个终端之中的饼示意图透露单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示整形体标明传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)更为金属量为每个metacluster筒终点站示意图(金属量> 0.05%)确切为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。橙色左上角均是由捐献者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模改进型证实，Treg高频赴援的减少是的发展较快的标志。分级门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)更为SP行动者和比如说的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的均是由性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR传达进行时剥离，建模FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)组成员以及供形体SP 606(橙色)之中CD25+ cd127的高频赴援汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控孙子集的筒终点站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突造出的簇被识别为SP和HD函数调用之间的不同。(j)筒终点站示意图揭示了在SP(黑斑)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的更为金属量(分之一)。(k)直方示意图揭示每个簇的性状(深蓝色)和Treg标明更为传达与氛围传达(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。氛围与所有其他簇之中标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

示意图3 与心理健康献血者相比之下，的发展较快者梦境treg的GITR减少。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个传达标明的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热示意图(sp606不还包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之中所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR传达串联，揭示直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(橙色)所有供形体还包括，p< 0.05(蓝色)供形体SP 606和比如说的HD不还包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR传达，从分级门控，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)串联，揭示直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

示意图4 来自较快的发展的CD4+ treg巨噬细胞控制波动CD4+T巨噬细胞的意志力减缓。SP组成员用蓝色的终点站和左上角透露，HD组成员用粉红色的终点站和左上角透露，橙色的终点站/左上角透露供形体sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按观察的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠可借巨噬细胞，培训3当晚进行时流式巨噬细胞奥义扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者更为可不的treg培训(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培训。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE可借总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可借总和。用到乙型肝炎对照(启动时的响可不巨噬细胞都有treg)计算可借总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

示意图5 波动CD4+T巨噬细胞对较快的发展的T巨噬细胞可借的可借更敏感。SP组成员用蓝色的终点站和左上角透露，HD组成员用粉红色的终点站和左上角透露，橙色的终点站/左上角透露供形体sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按观察的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠可借巨噬细胞，培训3当晚进行时流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因孙子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者协力培训。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE可借三份(b)。(c,d) CD25可借三份(c)和CD134可借三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训之中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

推论：我们得造出推论的推论是，来自较快的发展孙子的可借梦境CD4+Treg在GITR传达之中赢取了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1改进型肝炎风险变异之中的一般而言的必要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28